摘要：本研究旨在建立同时测定人乳头瘤病毒(human papilloma virus， HPV)16型E6蛋白和L1蛋白浓度的时间分辨荧光免疫层析定量检测方法。通过优化载有镧系元素荧光微球标记抗体量、包被抗体浓度和反应时间，制备联合检测试纸条，对所建立的联合检测方法进行性能及临床一致性评价。HPV16 L1及E6抗体最佳标记量分别为8 μg、10 μg，包被划膜量均为1.5 mg/mL；最佳检测时间为加样后10 min；检测HPV16 L1及E6蛋白线性范围分别为5-320 ng/mL、2-64 ng/mL；最低检测限分别为1.78 ng/mL、1.09 ng/mL；与人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus， HIV)、梅毒螺旋体(Treponema Pallidum， TP)、HPV18 E6及L1蛋白无交叉反应；准确度均在97%-107%之间；采用本研究制备的试纸条检测样本，区分宫颈癌及癌前病变患者与健康人的灵敏度为97.46%，特异性为90.57%，诊断准确率为95.32%，受试者工作特征曲线下的面积(area under curve， AUC)为0.980 1，95%置信区间(confidence interval， CI) (0.956 5， 1.000 0)。本研究制备的时间分辨荧光免疫层析联合定量检测HPV16型E6蛋白与L1蛋白试纸条可为宫颈癌及癌前病变患者的早期筛查及病程评估提供辅助诊断方法。
文章目录
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试剂与仪器设备
1.1.2 室内参考品与原材料
1.2 方法
1.2.1 荧光微球标记物制备
1.2.2 试纸条制备及检测
1.3 工艺优化
1.3.1 抗体标记量与检测线包被抗体浓度的优化
1.3.2 检测时间优化
1.4 性能评价
1.4.1 线性范围
1.4.2 最低检测限
1.4.3 特异性
1.4.4 准确度
1.4.5 临床一致性
2 结果与分析
2.1 抗体标记量与Ｔ线包被抗体浓度的优化
2.2 检测时间
2.3 线性范围
2.4 最低检测限
2.5 特异性
2.6 准确度
2.7 临床一致性
3 讨论与结论
