摘要：目的：利用废弃猪笼液中的蛋白酶来消减牛乳主要致敏原蛋白的致敏性。方法：首先采集了米兰达猪笼草(Nepenthes × Miranda)的猪笼液，经过滤、5 kDa膜超滤、真空冷冻干燥和复溶获得酶活为126.276 U/mL的猪笼液蛋白酶液。然后用此酶对牛乳蛋白进行酶解，通过液相色谱-二级质谱法(LC-MS/MS)鉴定酶解后肽段产物，对比致敏原表位数据库以判断蛋白酶对表位的酶切情况。结果：牛乳主要致敏原蛋白中P1位的K、V、F、R、Y、I、S和L以及P1’位的D、A、V、I、L、F、E、R、Y、N、T、Q、S、W和P的肽键被有效酶解，酶切位点位于相对应的表位内，且位于蛋白表面和内部的表位均有被酶解。其中，来自α-LA的表位Eα-LA1中的K-V以及表位Eα-LA2中的K-V和K-A被酶解频率较高，来自β-LG的被酶解频率高的表位处的肽键为Eβ-LG1和Eβ-LG2中的L-D、V-Y和Y-V，来自αs1-CN的表位Eαs1-CN1中大部分的R-F和F-F被高频酶解，来自αs2-CN的表位Eαs2-CN1中的L-N、R-Y、K-F和K-T和表位Eαs2-CN2中的K-T、K-L和K-I被酶解频率较高，β-CN中被酶解频率较高的表位为Eβ-CN1和Eβ-CN2中的L-Q、S-W、D-V、L-T、T-D和E-N。结论：猪笼液蛋白酶水解对牛乳蛋白致敏原蛋白表位表现出不同程度的破坏作用，猪笼液有望成为新型蛋白酶开发的资源，实现农业废弃物再利用。
文章目录
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.2 实验方法
1.2.1 猪笼液蛋白酶液制备
1.2.2 猪笼液蛋白酶蛋白水解活性测定
1.2.3 猪笼液蛋白酶酶解牛乳蛋白
1.2.3.1 酶解乳清蛋白
1.2.3.2 酶解酪蛋白
1.2.4 酶解后肽段分子量分布鉴定
1.2.5 致敏原表位酶解鉴定
1.2.5.1 HCN和HWPC前处理
1.2.5.2 色谱条件
1.2.5.3 质谱条件
1.3 数据处理
2 结果与分析
2.1 酶解后肽段分子量分布鉴定
2.2 致敏原表位酶解鉴定
2.2.1 WPC中主要致敏原蛋白α-LA的线性表位的酶解
2.2.2 WPC中主要致敏原蛋白β-LG的线性表位的酶解
2.2.3 CN中主要致敏原蛋白αs1-CN的线性表位的酶解
2.2.4 CN中主要致敏原蛋白αs2-CN的线性表位的酶解
2.2.5 CN中主要致敏原蛋白β-CN的线性表位的酶解
3 讨论与结论
