摘要：本研究旨在获取肉花雪胆(Hemsleya carnosiflora C.Y. Wu et C.L. Chen)活性成分雪胆素生物合成途径的功能基因。试验以肉花雪胆的块茎及叶片为研究材料，使用Illumina高通量测序平台对其进行转录组测序，Trinity软件进行从头组装和组装结果评估；测序数据通过与各大数据库比对，进行unigene的功能注释与分类，利用KEGG数据库分析雪胆素合成代谢途径的相关功能基因。结果表明，通过转录组测序，共获得42.82 Gb clean data，Trinity组装后得到49 740个unigene及87 003个transcript；BLAST比对后进行6个数据库(GO， KEGG， eggNOG， NR， Swiss-Prot， Pfam)的分析，发现共有49 203个unigene注释到以上6个数据库中；在NR物种注释中发现肉花雪胆与苦瓜(Momordica charantia)同源性较高；在GO及KEGG的注释及富集中发现，差异基因主要富集在代谢通路。通过转录组测序，共筛选出与雪胆素生物合成相关的功能基因60个，并通过定量PCR技术验证了该生物合成通路中12个关键酶基因的表达情况。该研究为进一步解析雪胆素生物合成途径及机制奠定了基础，同时也为提升肉花雪胆的品质、促进其资源的综合开发提供了一定的参考价值。
文章目录
1结果与分析
1.1转录组测序与组装分析
1.1.1转录组测序
1.1.2组装分析
1.2 unigene和转录本功能注释与分类
1.2.1 unigene和转录本功能注释
1.2.2 NR数据库注释基因物种分布
1.2.3 unigene的GO注释与分类
1.2.4 unigene的KEGG注释与分类
1.3差异基因表达分析
1.3.1表达量差异分析
1.3.2 GO分类及富集分析
1.3.3 KEGG分类及富集分析
1.4雪胆素合成相关功能基因的挖掘
1.5关键酶基因实时荧光定量分析
2讨论
3材料与方法
3.1试验材料
3.2 RNA的提取、cDNA文库构建及测序
3.3测序数据统计与组装
3.4转录组功能注释
3.5基因表达量差异分析
3.6关键酶基因实时荧光定量分析
